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    產品中心
    產品名稱:

    H9 人胚胎干細胞(無飼養層)/STR鑒定

    產品型號: H9
    產品時間: 2025-07-09
    描述:H9 人胚胎干細胞(無飼養層)/STR鑒定
    H9 人胚胎干細胞特性
    1) 來源:人胚胎干細胞
    2) 形態:貼壁,呈克隆狀
    3) 含量:&gt;1x106 個/mL
    4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
    5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
    6)用 mTeSR1 培養人胚胎干細胞(hESC)和人 iPS 細胞(hiPS)

    產品介紹

    H9 人胚胎干細胞/STR鑒定(無飼養層)特性

    1) 來源:人胚胎干細胞

    2) 形態:貼壁,呈克隆狀

    3) 含量:>1x106 個/mL
    4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
    5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

    運輸和保存

    可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

    (1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;

    (2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

    (3)收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。
     
    細胞用途:僅供科研使用。
                           
    細胞接收后的處理:
    1) 收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發給我們。
    2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
    3) 將T25瓶中的細胞培養基離心后,去上清,添加6ml*培養基,加入新的T25瓶中繼續培養。
    4)   如果細胞長滿80%請及時進行細胞傳代.
     H9 人胚胎干細胞(無飼養層)/STR鑒定

    用 mTeSR1 培養人胚胎干細胞(hESC)和人 iPS 細胞(hiPS)

    1. 試劑和材料

    mTeSRTM1 培養基試劑盒(產品號#85850)包括:

    成分

    規格

    存放條件

    mTeSRTM1

    基礎培養基(#85851)

    400

    mL

    2-8

    mTeSRTM1

    5X 添加物(#85852)

    100

    mL

    -20

    所需的其他試劑和材料

    產品

    品牌/貨號

    Cryostor CS10

    STEM CELL/07930

    溫和分離液

    STEM CELL/07174

    DPBS(不含鈣鎂離子)

    GIBCO/14190

    DMEM/F12

    GIBCO/11330

    Y27632

    STEM CELL/ 72302

    BD Matrigel hESC-qualified

    Matrix

    CORNING/354277(BD 該系列產品已被

    CORNING 收購)

    細胞刮

    如,CORNING/3010

    另需細胞培養板/瓶/皿,15ml 離心管和移液管等細胞培養耗材。

     

    2. 試劑的制備

    2.1 mTeSR1 的制備
    2.1.1 在室溫 (15 - 25°C) 下或冰箱內 (2 - 8°C) 過夜解凍 mTeSR
    ™1 5X 添加物(成分編號 #05852)。 如需要,可在無菌條件下將 5X 添加物分裝為適量的工作等份,并在 -20°C 下凍存。冷凍的分量須在 3 個月內用完。解凍后的分量應在 1 天內制備成*的 mTeSR™1 培養基。請勿在解凍后再次冷凍。
    2.1.2 在無菌條件下將 100 mL 的 5X 添加物全部解凍后加入到 400 mL 的基礎培養基中,形成總共 500 mL 的容量。充分混勻。*的 mTeSR™1 培養基 在(2 - 8°C) 下儲存時可維持穩定狀態多 2 周,或在-20°C 下冷凍時可維持穩定狀態多 6 個月。在室溫(15 - 25°C) 下或冰箱內(2 - 8°C) 過夜解凍冷凍的培養基,不要長時間放在 37°C 水浴內加熱培養液。
    如果在無菌條件下制備,*的 mTeSR™1 培養基可直接使用,但如需要, 也可使用 0.2 µm 的低蛋白結合過濾器過濾培養基。

    2.2 Matrigel 工作液配制和包被

    應分裝和冷凍保存 BD Matrigel™ hESC-qualified matrix(BD 產品號
    #354277)。有關分裝的完整說明和建議,請查閱與 BD Matrigel™ 同時提供的產品說明書。分裝后的小包裝可在-70°C 下多儲存 6 個月。
    將一份BD Matrigel™ 加入到25 mL 的DMEM/F12 中,這足以包被四個6 孔培養板(1 mL/孔)或三個 100 mm 培養皿(8 mL/培養皿)。
    (1) 將 25 mL 的稀釋培養基(DMEM/F12;產品號#11330 )分裝入離心管放在冰上。
    (2) 將一份分裝后的 BD Matrigel™自-70°C 取出 ,在冰上解凍,直到成為液體,然后將解凍后的 BD Matrigel™ 加入到冷稀釋培養基(在 50
    mL 的試管中)中,充分混勻。如需要,可用冷培養基沖洗 EP 管。
    (3) 立即用稀釋后的 BD Matrigel™ 溶液包被組織培養板。對于 6 孔培養板,每個孔使用 1 mL 稀釋后的 BD Matrigel™;對于 100 mm 培養板, 每個培養板使用 8 mL 稀釋后的 BD Matrigel™。旋動培養板,以使 BD
    Matrigel™ 溶液均勻地分布在表面上。
    要包被其他尺寸的組織培養皿,則按照需要包被的培養皿的表面積決定稀釋后的 BD Matrigel™用量。
    (4) 使用前,包被的培養板應放在培養箱(37°C) 下至少 1 個小時。請勿讓培養板脫水。在培養板可供使用之前,請勿移除 BD Matrigel™ 溶液。
    如果不立即使用,培養板必須密封,以防止脫水(如利用 Parafilm®)。包被后的培養板可在 2 - 8°C 下多儲存 7 天。
    如果 BD Matrigel™溶液并未*覆蓋表面,則無法實現*的 hPSC 培養;因此,不建議使用含有溶液已蒸發區域的培養板。
    (5) 輕輕地將培養板向一個角落傾斜,使過剩的 BD Matrigel ™ 溶液匯聚在那個角落。用一次性移液管或通過抽取移除溶液。確保移液槍頭不刮到已包被的表面。立即加入 mTeSR™1 培養基和細胞。
    如果已將培養板在 2 - 8°C 下儲存,則在移除 BD Matrigel™溶液之前, 將培養板在培養箱 (37°C) 下放置 30 分鐘。

    2.3 配制 Y27632 溶液

    Y27632 粉末溶解在 DPBS 中,配成濃度為 10mM 的儲存液,0.22um 濾膜過濾除菌。分裝后冷凍于-20°C,6 個月內使用。
    Y27632 提高復蘇和傳代后的克隆形成率,所以只在復蘇步驟和傳代步驟添加,換液時不添加 。
     

    3. 解凍復蘇 hES /hiPS

    在開始操作程序之前,將所有試管、加熱后的培養基和培養板準備好,以確保盡快完成解凍程序。
    (1) 快速在 37°C 水浴槽中解凍 hPSC,方法是輕柔持續地搖動冷凍管,直到

    只剩下一個小冷凍團。從水浴槽中取出冷凍管,用 70% 乙醇擦拭,以進行消毒。
    (2) 使用一個 1 mL 的移液管將冷凍管中的內容物轉移至一個 15 mL 錐形試管中, 過程必須輕柔防止吹散細胞團。
    (3) 將 5 - 7 mL 溫暖的 mTeSR™1 逐滴加入試管中,在加入培養基的同時輕柔混勻。
    (4) 在室溫(15 - 25°C) 下,以 300 x g 離心細胞 5 分鐘。
    (5) 吸出培養基,使細胞團保持完整。使用一個 1 mL 的移液管,輕輕地將細胞重新懸浮在 1 - 2 mL 的 mTeSR™1 中,確保維持細胞的團塊狀態。根據終培養細胞的液體體積,加入 ROCK inhibitor Y27632, 終濃度為 10uM
    (6) 輕輕地將培養板/皿向一個角落傾斜,使過剩的 BD Matrigel™ 溶液匯聚在那個角落,從而從已包被的組織培養板中移除 BD Matrigel™。使用一次性移液管或通過抽取移除溶液。確保移液槍頭不刮到已包被的表面。
    如果已將培養板在 2 - 8°C 下儲存,則在移除 BD Matrigel™溶液之前,將培養板在培養箱 (37°C) 下 放置 30 分鐘。
    (7) 將含有細胞聚集體的培養基轉移至 BD Matrigel™ 包被的培養器皿上。一般一支凍存管細胞復蘇到一個 T25 培養瓶或 6 孔板中的 2 個孔。
    (8) 將培養板放在 37°C 培養箱中,然后快速地左右、前后移動培養板,以均勻地將細胞團分布在各個孔內。在 37°C、5% CO2 和 95% 濕度的條件下培養細胞。
    (9) 每天更換培養基(不需要再添加 Y27632)。在解凍后大約 5 - 7 天內檢查可進行傳代的未分化集落(有密集的中心)。
    如果在解凍后僅觀察到很少的未分化集落,則可能需要只選擇這些集落進行傳代,并將它們重新放在新的 BD Matrigel™包被的培養板大小相同的孔中。
    (10) 每天換液。
     

    4. 用 mTeSR1 對 hES/hiPS 進行傳代

    在 mTeSR™1 中生長的細胞當集落變得較大、中心變得密集和明亮(對比其邊緣)而相鄰的集落開始融合時,這時可進行傳代。根據接種的細胞團的大小和密度,傳代周期為 5 天左右。如果太早對集落進行傳代或傳代太過頻繁,則細胞可能吸附不好、產量將會減少且細
    胞可能分化。如果太晚對集落進行傳代,培養物將開始顯示分化跡象(特點是細胞類型出現不同的形態)。
    (1) 分裝足夠的 mTeSR™1 以傳代細胞。將分裝的 mTeSR™1、溫和分離液(產品號#07174)和 DMEM/F-12 加熱至室溫( 25°C 左右)。
    (2) 使用顯微鏡觀察確定分化的區域。用氈制粗頭筆或透鏡標志器在培養板底部標記這些區域。如果培養物品質優異,分化的區域不會超過培養孔的 20%。
    (3) 用移液槍頭刮除或抽取,去除分化區域。
    (4) 從 hPSC 培養物中吸出培養基,然后用 DPBS(不含鈣鎂離子)沖洗。
    (5) 向每個培養瓶內加入溫和分離液(每個 T25 加 3ml),覆蓋底面,在室溫下靜置 1 分鐘。

    (6) 吸掉溫和分離液,然后用 6ml DMEM/F-12 輕輕的洗滌培養皿一次。
    (7) 向培養瓶內加適量 mTeSR™1,并用細胞刮(如 Corning 產品號#3010)將細胞集落刮離培養瓶底。
    (8) 將分離的細胞聚集體轉移至一個 15 mL 錐形試管中,并加入適量 mTeSR
    ™1 沖洗培養瓶,以收集殘留的細胞聚集體。將沖洗液一并收集到 15 mL 離心管內。
    輕輕吹打細胞聚集體 2-3 次,調整培養基的體積,以實現適當的分配。根據終培養細胞的液體體積,加入 ROCK inhibitor Y27632, 終濃度為 10uM。
    (9) 將細胞聚集體與 mTeSR™1 接種至新的 BD Matrigel™ 包被的培養板上。一般傳代周期為 5 天左右,傳代比例為 1:3-1:6。如果集落過于密集或過于稀疏,則下一次傳代時相應地調整傳代比例。請注意,這些指導基于中科院干細胞庫 hESC H1 和 H9 以及 hiPS DYR0100 和 DYP0530 細胞系的生長特征,在其他不同的細胞系和實驗室之間可能會存在差異。
    (10) 快速前后和左右多次移動培養板,以使細胞分散在各個孔的表面。將培養板放在 37°C 培養箱中。確保新接種的集落均勻地分布在 BD Matrigel
    ™包被的培養板的整個表面。細胞團分布不均勻有可能導致 細胞分化。
    (11) 每天換液。

    5. 冷凍 hESC 或 hiPS 細胞

    (1) 用顯微鏡觀察需要凍存的培養物,確定已分化的區域。用氈制粗頭筆或透鏡標志器在培養板底部標記這些區域。
    如果培養物品質優異,分化的區域不會超過培養孔的 20%。
    (2) 用移液槍頭刮除或抽取,去除分化區域。
    (3) 從培養孔中吸出殘留的培養基,然后用 DPBS(不含鈣鎂離子)沖洗。
    (4) 向每個培養瓶內加入溫和分離液(每個 T25 加 3ml),覆蓋底面,在室溫下靜置 1 分鐘。
    (5) 吸掉溫和分離液,然后用 6ml DMEM/F-12 輕輕的洗滌培養皿一次。
    (6) 向培養瓶內每個孔內加適量 mTeSR™1,并用細胞刮(如 Corning 產品號
    #3010)將細胞集落刮離培養瓶底。
    (7) 將分離的細胞聚集體轉移至一個 15 mL 錐形試管中,并加入適量 mTeSR™1 沖洗培養瓶,以收集殘留的細胞聚集體。將沖洗液一并收集到 15 mL 離心管內。小心地盡量將細胞團保持到大。
    (8) 在室溫(15- 25°C) 下,以 300 x g 離心裝有細胞聚集體的 15 mL 離心管
    5 分鐘。離心細胞時,準備和標記凍存管。
    (9) 輕輕地吸出上清液,小心保持細胞團完整。
    (10) 使用預冷的(2 -8°C) CryoStor™CS10 輕輕地重新懸浮細胞團,然后將細胞懸液轉移至冷凍管中。
    (11) 將冷凍管置于程序降溫盒內(大約-1°C /min)-80°C 冷凍細胞過夜, 然后轉移至液氮長期儲存。

    鏡像綺點(上海)細胞技術有限公司主要產品和技術服務:

    一、原代細胞服務
           各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源;
           多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源;
           原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等;
           原代細胞相關技術服務和整體實驗外包服務;

    二、細胞株/系服務
           細胞株/系培養、增殖、凍存和相關說明書;
           細胞系培養過程的技術指導;
           細胞系培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等;

    三、iPS細胞
           iPS細胞基礎培養(有滋養層or無滋養層在);
           iPS細胞增殖及冷凍保存;
           iPS基礎培養技術實習;
           新藥及實驗儀器上市前評估;

    四、技術外包服務:各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務等

    五、其他:根據客戶需要定制服務等

    序號

    產品名稱

    貨號

    規格

    售價

    備注

    1

    培養基1640

    icell-0002

    500ml

    140

     

    2

    培養基DMEM

    icell-0001

    500ml

    140

     

    3

    培養基DMEM/F12

    icell-0005

    500ml

    140

     

    4

    內皮細胞培養基ECMsciencel

    icell-0016

    500ml

    2280

     

    5

    動物上皮細胞培養基Epicm-a

    icell-0015

    500ml

    1980

     

    6

    上皮細胞培養基Epicm

    icell-0017

    500ml

    1980

     

    7

    Mccoy’s 5A 培養基

    icell-0011

    500ml

    160

     

    8

    MEM培養基

    icell-0012

    500ml

    140

     

    9

    FBS北美胎牛血清

    GIBCO   16000-044

    500ml

    6800

     

    10

    FBS墨西哥胎牛血清

    10437-028

    500ml

    5616

     

    11

    馬血清

    gibco.16050122

    500ml

    1489

     

    12

    DMSO

    sigma-D2650

    100ml

    1520

     

    13

    PBS片劑(1000ml)

    09-9400-100

    100片

    4170

     

    14

    PS雙抗(進口)

    15140-122

    100ml

    452

     

    15

    胰蛋白酶

    25200-072

    500ml

    665

     

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